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高效液相色譜柱的選擇及怎么裝柱介紹

更新時間:2021-11-23      點(diǎn)擊次數(shù):4030
高效液相色譜柱的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運(yùn)動時, 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
高效液相色譜柱怎么裝柱:
1. 色譜柱應(yīng)該是可以直接接在勻漿罐上的,如果不能,則需要一個轉(zhuǎn)換接頭。這個轉(zhuǎn)換接頭的尺寸很重要,既要能防止漏液,又要避免過硬或尺寸不合適而導(dǎo)致色譜柱接口螺紋的損壞;
2. 具體裝柱過程一般來說是①先以合適的勻漿液(多為有機(jī)溶劑,劉國詮老師的《色譜柱技術(shù)》一書中列的比較全,可供參考)將填料充分分散(可以借助攪拌、超聲等方式);②在填料勻漿的過程中,完成準(zhǔn)備工作,即把色譜柱接在勻漿罐的下端(色譜柱不接勻漿罐的一段要接好篩板和柱頭,確保擰緊但不能擰死以免損壞色譜柱),打開勻漿罐上端和氣泵之間的接頭以便灌入勻漿液;③勻漿液罐好后,接好勻漿罐上端接頭,開始加壓;④選擇合適的壓力,就可以把填料壓實了;⑤穩(wěn)定在適當(dāng)?shù)膲毫ι蠅阂欢〞r間后,卸掉壓力,卸下色譜柱,把接勻漿罐這一段的填料抹平,裝上篩板和柱頭即可使用。
3. 裝柱是個困難的過程,需要耐心摸索壓力、勻漿液體積等參數(shù),才能確保柱床均勻密實,達(dá)到**柱效和峰形。如果裝的不好,則可能出現(xiàn)柱效不夠,或拖尾等問題。
高效液相色譜柱的選擇:
看你的流動相而定。
正相和反相是根據(jù)固定相和流動相的極性差異定義的。正相是固定相極性大,反相是流動相極性大,而樣品的分離情況與極性直接關(guān)聯(lián)。
像氰基柱和氨基柱,都是正相反相都可以用,主要區(qū)分是根據(jù)你的流動相。如果你的流動相中是水、甲醇、乙腈這些東西,那肯定是反相的。如果是正己烷、乙醇、四氫呋喃這些東西作為流動相,那基本就是正相的。
個人建議,使用反相色譜柱,不要使用正相的流動相。
第一:你色譜柱的填料不同,跑出來的色譜峰可能*不同。檢測方法不可取。
第二:反相色譜柱沖入像是四氫呋喃這類的物質(zhì),很有可能導(dǎo)致填料坍塌。
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